LRP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401708

Panoramica

LRP4 (low-density lipoprotein receptor–related protein 4) è un recettore transmembrana a singolo passaggio della famiglia dei recettori LDL che funziona come co-recettore e piattaforma di segnalazione sulla superficie cellulare. È noto soprattutto per il ruolo nella regolazione dello sviluppo della sinapsi neuromuscolare tramite la segnalazione agrina–LRP4–MuSK, coordinando l’aggregazione dei recettori dell’acetilcolina e la maturazione sinaptica. LRP4 modula inoltre gli output di segnalazione legati a Wnt/β-catenina e alle BMP legando ligandi extracellulari e influenzando la disponibilità delle vie di segnalazione a livello di membrana. Alterazioni genetiche e autoimmuni di LRP4 sono state associate a disturbi della giunzione neuromuscolare e a fenotipi scheletrici, a conferma della sua importanza nel traffico recettoriale, nell’organizzazione sinaptica e nel patterning tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LRP4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LRP4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LRP4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRP4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LRP4 per lo studio della segnalazione di LRP4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LRP4 critici per la funzione di LRP4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LRP4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LRP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LRP4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRP4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LRP4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LRP4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LRP4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.