LRP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401589-NIC

A proteína principal do vault (MVP), também conhecida como proteína relacionada à resistência pulmonar (LRP), é o principal componente estrutural das partículas ribonucleoproteicas do tipo vault, que participam do transporte nucleocitoplasmático, da integração de sinais e das respostas ao estresse celular. A MVP tem sido associada à modulação de vias de sinalização ligadas a PI3K/AKT, MAPK e NF-κB, e pode influenciar a endocitose, a autofagia e a sinalização imune inata por meio de interações com múltiplas proteínas adaptadoras. Ao afetar o tráfego intracelular e o processamento de xenobióticos, a MVP é frequentemente estudada no contexto de fenótipos de resistência a múltiplos fármacos, programas de sobrevivência de células tumorais e regulação de processos inflamatórios. Alterações na expressão de MVP/LRP também foram relatadas em diversos tipos de câncer e em condições neurológicas e imunorrelacionadas, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas focadas em vias de sinalização.

LRP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MVP em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MVP. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MVP. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MVP interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.