LPAAT-β CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405045-ACT

AGPAT2はリゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼβ（LPAAT-β）をコードしており、これは小胞体に局在する酵素で、リゾホスファチジン酸をアシル化してホスファチジン酸を生成します。ホスファチジン酸は、グリセロリン脂質およびトリアシルグリセロール生合成における重要な中間体です。LPAAT-βはホスファチジン酸の利用可能量を制御することで、膜の新生、脂肪滴形成、ならびに代謝ストレスやオルガネラ恒常性と交差する脂質介在性シグナル伝達過程に影響を与えます。AGPAT2活性は脂肪細胞における脂質貯蔵および全身のエネルギーバランスと密接に関連しており、機能喪失型の変異は先天性全身性脂肪萎縮症および重篤な代謝異常と関連します。これらの特徴により、AGPAT2は脂質リモデリング、脂肪細胞分化、ならびにリン脂質代謝における疾患関連の撹乱を研究するうえで重要な標的となります。

LPAAT-β CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AGPAT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LPAAT-β CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AGPAT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAGPAT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LPAAT-βの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAGPAT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLPAAT-β依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAGPAT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLPAAT-β経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。