LOC285636 Plasmide Double Nickase (h): sc-415435-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LOC285636 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LOC285636 Double Nickase Plasmid (h) e il LOC285636 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira C5orf51. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LOC285636 Plasmide Double Nickase (h) | sc-415435-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LOC285636 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-415435-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
C5orf51 codifica la proteina umana LOC285636, prodotto genico non ancora completamente caratterizzato e con annotazione funzionale limitata nelle attuali banche dati di pathway. Le evidenze genomiche e trascrittomiche disponibili suggeriscono un’espressione dipendente dal contesto, supportando l’indagine di potenziali ruoli nelle reti di regolazione genica, nel mantenimento dello stato cellulare e in programmi specifici di linea cellulare. Poiché i loci di open reading frame scarsamente caratterizzati possono influenzare indirettamente il processamento dell’RNA, la regolazione associata alla cromatina o la proteostasi, si ricorre comunemente a studi di perturbazione per collegare LOC285636 a processi cellulari definiti. La profilazione degli effetti della disruption di LOC285636 in sistemi modello pertinenti può aiutare ad associare questo locus a firme molecolari osservate in fenotipi rilevanti per la malattia, senza implicare esiti clinici.
LOC285636 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus C5orf51 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di C5orf51. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di C5orf51. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con C5orf51 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.