Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Limd1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404413-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Limd1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Limd1 Double Nickase Plasmid (h) e il Limd1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LIMD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Limd1 Antibody (H-4): sc-271448
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Limd1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404413-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Limd1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404413-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LIMD1 codifica Limd1, una proteina adattatrice contenente domini LIM che funge da impalcatura (scaffold) nel nucleo e nel citoplasma per coordinare interazioni proteina–proteina. Limd1 è stata collegata al controllo trascrizionale e all’integrazione dei segnali in nodi di regolazione della crescita, inclusa la regolazione della via Hippo attraverso interazioni che influenzano l’attività di YAP/TAZ. Attraverso questi ruoli, LIMD1 contribuisce al controllo della proliferazione cellulare, dell’adesione e dei programmi di espressione genica responsivi allo stress. Un’espressione alterata di LIMD1 o la sua perdita genomica sono state associate a fenotipi legati alla tumorigenesi in molteplici contesti tissutali, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sul controllo della crescita e sul crosstalk tra vie di segnalazione.
Limd1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LIMD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LIMD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LIMD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LIMD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.