LHPP Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429326-ACT

O gene Lhpp de camundongo codifica a LHPP, uma fosfatase dependente de histidina que hidrolisa resíduos de fosfo-histidina em substratos proteicos, contribuindo para a regulação da sinalização por fosfo-histidina. Ao modular o controlo da atividade enzimática e do fluxo metabólico dependente de fosforilação, a LHPP está associada à bioenergética celular e a processos responsivos a nutrientes. Alterações na expressão ou na atividade de LHPP têm sido associadas a desregulação do controlo do crescimento e a reprogramação metabólica em contextos relevantes para doenças, tornando-a um alvo útil para estudar o acoplamento entre sinalização e metabolismo. Assim, Lhpp é frequentemente investigado em modelos que exploram a dinâmica de fosforilação, a adaptação ao stress e vias que influenciam a proliferação e a diferenciação.

LHPP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lhpp sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LHPP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lhpp em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lhpp, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LHPP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lhpp nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LHPP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LHPP em células tumorais com expressão de Lhpp silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.