leupaxin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405101-ACT

LPXN codifica a leupaxina, uma proteína adaptadora da família paxilina enriquecida nas adesões focais, onde coordena a sinalização dependente de integrinas com a remodelação do citoesqueleto de actina. Por meio de interações com quinases e proteínas de ancoragem (scaffold), a leupaxina contribui para processos de adesão celular, migração e mecanotransdução que moldam a detecção da matriz extracelular e programas transcricionais a jusante. A atividade de LPXN se cruza com vias ligadas a adesões focais e a Rho GTPases que regulam a motilidade celular e o comportamento invasivo. Expressão ou sinalização desreguladas envolvendo a leupaxina foram relatadas em múltiplos contextos tumorais e em estados funcionais de células imunes, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de fenótipos associados à metástase e de sinalização dirigida por adesão.

leupaxin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LPXN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

leupaxin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LPXN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LPXN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de leupaxin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LPXN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de leupaxin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via leupaxin em células tumorais com expressão de LPXN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.