LDH-A Double Nickaseプラスミド (h): sc-400403-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- LDH-A Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- LDH-Aダブルニカースプラスミド（h）およびLDH-Aダブルニカースプラスミド（h2）は、LDHAを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: LDH-A 抗体 (E-9): sc-137243
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
LDH-A Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400403-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LDH-A Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400403-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのLDHAは、乳酸脱水素酵素A（LDH-A）をコードしている。LDH-Aは細胞質に存在する酵素で、ピルビン酸と乳酸の相互変換を触媒すると同時に、NADH/NAD+の再循環を担い、高増殖状態や低酸素条件下での解糖系によるATP産生を支える。LDH-Aは中心炭素代謝の要となる分子であり、解糖系と乳酸発酵を結び付け、酸化還元バランス、ピルビン酸フラックス、ならびに細胞外微小環境との代謝物交換に影響を及ぼす。NAD+再生と乳酸産生への作用を通じて、LDH-Aは、グルコース利用の変化やストレス適応に伴う代謝リプログラミングに寄与する。LDHAの発現や活性の異常は、複数の疾患状況で見られる代謝表現型と関連づけられており、増殖、低酸素シグナル、エネルギー代謝の可塑性との関係でしばしば研究されている。
LDH-A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LDHA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LDHA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LDHAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LDHAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。