Lck BP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420811

概要

Hcls1は、マウスにおいて造血細胞特異的Lyn基質1（Lck BP-1）をコードしており、免疫系細胞系列に多く発現するアダプタータンパク質として、抗原受容体シグナル伝達と細胞骨格の再編成を結び付けます。Lck BP-1は、Srcファミリーキナーゼやアクチン制御複合体とのリン酸化依存的な相互作用を介して、免疫受容体刺激に伴うカルシウムフラックス、MAPK活性化、ならびに細胞形態や運動性の動的変化に寄与します。このシグナル結節は、リンパ球の活性化、接着、トラフィッキングに影響し、受容体近傍のイベントを下流の転写応答へとつなぎます。Hcls1関連経路の制御異常は、炎症性シグナル、異常な免疫細胞活性化、造血細胞生物学の研究において重要です。

Lck BP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHcls1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hcls1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hcls1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Lck BP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Lck BP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hcls1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Lck BP-1の機能に不可欠なHcls1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hcls1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Lck BP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLck BP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hcls1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Lck BP-1 HDRプラスミド（m）および Lck BP-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHcls1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHcls1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。