LAR Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402674-LAC

A fosfatase de tirosina proteica do tipo receptor F (PTPRF), também conhecida como LAR, é uma fosfatase de tirosina proteica do tipo receptor que modula a sinalização dependente de fosforilação na membrana plasmática e nas interfaces célula–célula ou célula–matriz. A LAR influencia a dinâmica das adesões focais, o crescimento de neuritos e a organização sináptica ao regular vias a jusante de receptores tirosina-quinase e da sinalização associada a integrinas, afetando a remodelação do citoesqueleto e a migração celular. Por meio de seus domínios extracelulares semelhantes a moléculas de adesão e de sua atividade fosfatase intracelular, a PTPRF pode ajustar as respostas das vias MAPK/ERK e PI3K/AKT por meio da desfosforilação de substratos específicos. A desregulação da sinalização de PTPRF/LAR tem sido associada a alterações na sinalização metabólica e a fenótipos do neurodesenvolvimento ou neurodegenerativos, tornando-a relevante para estudos mecanísticos em sinalização de insulina, conectividade neuronal e programas celulares relacionados à invasão.

As Partículas de Ativação Lentivirais LAR (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PTPRF numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais LAR (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PTPRF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de LAR. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PTPRF e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.