LAP2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403613-NIC

ヒトTMPOは、ラミナ関連ポリペプチド2（LAP2）をコードしています。LAP2は核内膜の内側に局在するタンパク質で、ラミンおよびクロマチンに結合し、核のアーキテクチャを組織化するとともにゲノム安定性の制御に関与します。LAP2の各アイソフォームは、核膜の組み立て、ラミナ‐クロマチンの係留、そして有糸分裂後の細胞周期に連動した核の再形成に寄与し、転写プログラムやDNA複製タイミングにも影響を及ぼします。これらの構造的・制御的役割を通じて、TMPOはクロマチン構造制御、核へのメカノトランスダクション、核の完全性維持を担う経路と交差します。TMPO/LAP2が関与する核膜‐クロマチン相互作用の破綻は、異常な核形態と関連づけられており、核構造が攪乱される増殖性疾患や変性疾患の機序の文脈で研究されています。

LAP2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TMPO 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TMPO内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TMPOの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TMPOが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。