LAMP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400120

概要

LAMP1（リソソーム関連膜タンパク質1）は、後期エンドソームおよびリソソームに存在する主要なI型膜糖タンパク質であり、リソソームの構造的完全性の維持に寄与するとともに、小胞輸送、エンドソーム‐リソソーム融合、ならびにオートファジー‐リソソームフラックスに関与します。リソソームの細胞内配置、膜の保護、分解能に寄与することで、LAMP1は抗原プロセシング、膜タンパク質のターンオーバー、栄養ストレスに対する細胞応答に影響を与えます。LAMP1の量や局在の変化は、リソソーム生合成やストレス応答の指標としてしばしば用いられ、神経変性、感染、がん細胞の適応に関連する経路とも結び付けられています。さらにLAMP1は、オルガネラ動態やリソソーム関連シグナル伝達ネットワークを研究する際のリソソームマーカーとしても広く利用されています。

LAMP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLAMP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LAMP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LAMP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LAMP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LAMP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LAMP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LAMP1の機能に不可欠なLAMP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LAMP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LAMP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLAMP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LAMP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LAMP1 HDRプラスミド（h）および LAMP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLAMP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLAMP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。