Laminin γ-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404181-ACT

LAMC3 はラミニンγ3をコードしており、これは細胞外マトリックス（ECM）を構成する糖タンパク質のサブユニットで、基底膜においてα鎖およびβ鎖と会合してラミニンのヘテロ三量体を形成します。ラミニンγ3は、インテグリンおよびジストログリカンを介したシグナル伝達を協調し、それがフォーカルアドヒージョンの動態や細胞骨格の構築と連動することで、細胞―マトリックス接着、極性、移動に寄与します。これらの相互作用を通じて、LAMC3 は組織構築、神経突起の伸長、上皮バリア特性に影響を及ぼし、細胞外マトリックスのリモデリングを発生および恒常性維持のプログラムと結び付けます。ラミニン組成の変化や基底膜の完全性の破綻は、神経発達表現型、浸潤に関連する細胞挙動、ならびにマトリックス駆動性の分化状態変化の研究において重要な観点となります。

Laminin γ-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LAMC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Laminin γ-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LAMC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLAMC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Laminin γ-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLAMC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLaminin γ-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLAMC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLaminin γ-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。