Laminin γ-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401029-ACT

LAMC1はラミニンγ1をコードしており、ラミニンγ1は細胞外マトリックスを構成する必須の糖タンパク質鎖です。γ1鎖はαおよびβサブユニットと会合して、基底膜に存在する複数のラミニンアイソフォームを形成します。ラミニンγ1はインテグリンなどの受容体と結合し、細胞接着・極性・遊走を支えるとともに、細胞骨格の構築、細胞生存、分化プログラムに影響するシグナル伝達を協調的に制御します。基底膜の完全性維持における役割を通じて、LAMC1は組織形態形成や上皮―間葉相互作用にも寄与しており、これらの過程は線維化、腫瘍浸潤、血管機能障害などでしばしば再編成されます。ラミニンネットワークの破綻やLAMC1発現の変化は、さまざまなヒト疾患で見られる異常な細胞外マトリックス沈着や細胞―マトリックス間シグナル伝達の変化と関連づけられています。

Laminin γ-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LAMC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Laminin γ-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LAMC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLAMC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Laminin γ-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLAMC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLaminin γ-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLAMC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLaminin γ-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。