Plasmide CRISPR d'Activation (h) Laminin α-4: sc-401801-ACT

LAMA4 code la laminine α-4, une sous-unité glycoprotéique de la matrice extracellulaire qui s’assemble en isoformes de laminine-411/421 au sein des membranes basales. La laminine α-4 favorise l’adhésion cellule–matrice, la migration et la survie en se liant aux intégrines et à des récepteurs apparentés, en façonnant les microenvironnements vasculaires, épithéliaux et stromaux et en influençant des voies de signalisation en aval telles que FAK/PI3K–AKT et MAPK. Dans les tissus humains, LAMA4 contribue aux propriétés de barrière endothéliale et à l’organisation de la niche périvasculaire, et une composition altérée de la membrane basale impliquant les réseaux de laminines a été associée à une angiogenèse dérégulée, à l’inflammation, à la fibrose et aux interactions tumeur–stroma. Ces fonctions font de LAMA4 une cible utile pour étudier le remodelage de la matrice extracellulaire, la mécanotransduction et les phénotypes dépendants du microenvironnement.

Laminin α-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LAMA4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Laminin α-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LAMA4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LAMA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Laminin α-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LAMA4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Laminin α-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Laminin α-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de LAMA4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.