Laminin α-4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401801-ACT

LAMA4 codifica la laminina α-4, una subunità glicoproteica della matrice extracellulare che si assembla nelle isoforme laminina-411/421 all’interno delle membrane basali. La laminina α-4 favorisce l’adesione cellula–matrice, la migrazione e la sopravvivenza cellulare interagendo con integrine e recettori correlati, contribuendo a modellare i microambienti vascolare, epiteliale e stromale e influenzando vie di segnalazione a valle come FAK/PI3K–AKT e MAPK. Nei tessuti umani, LAMA4 contribuisce alle proprietà di barriera dell’endotelio e all’organizzazione della nicchia perivascolare, e alterazioni della composizione della membrana basale che coinvolgono le reti di laminina sono state associate ad angiogenesi deregolata, infiammazione, fibrosi e interazioni tumore–stroma. Queste funzioni rendono LAMA4 un bersaglio utile per studiare il rimodellamento della matrice extracellulare, la meccanotrasduzione e i fenotipi dipendenti dal microambiente.

Laminin α-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LAMA4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Laminin α-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LAMA4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LAMA4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Laminin α-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LAMA4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Laminin α-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Laminin α-4 nelle cellule tumorali con espressione di LAMA4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.