Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419412
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（m）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してL-type Ca++ CP β4ゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: L-type Ca++ CP β4 抗体 (H-7): sc-376432
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m) | sc-419412 | 20 µg | $397.00 |
概要
Cacnb4 は、L型電位依存性カルシウムチャネルの補助サブユニットである β4 をコードし、チャネルの輸送（トラフィッキング）、膜上での安定性、ならびにゲーティング動態を調節することで、興奮性組織における Ca²⁺ 流入の様式を形作ります。活動依存的なカルシウム流入を調整することにより、β4 は、膜の脱分極を神経伝達物質放出、遺伝子転写、シナプス可塑性へと結び付ける Ca²⁺ 依存性シグナル伝達カスケードに影響します。マウスモデルでは、Cacnb4 機能の変化が神経細胞の興奮性やネットワーク同期性を乱し、この経路が神経発達・精神神経系の表現型や発作感受性と関連することが示されています。さらに、カルシウムチャネルの構成制御に関わるこのタンパク質の役割は、回路成熟や活動依存的な細胞ストレス応答の研究においても重要です。
L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCacnb4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cacnb4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cacnb4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、L-type Ca++ CP β4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、L-type Ca++ CP β4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cacnb4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- L-type Ca++ CP β4の機能に不可欠なCacnb4エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、Cacnb4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびL-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cacnb4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
L-type Ca++ CP β4 HDRプラスミド（m）および L-type Ca++ CP β4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCacnb4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCacnb4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。