L-type Ca⁺⁺ CP α1F CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416338

概要

CACNA1Fは、興奮性細胞におけるCa2+流入を担い、膜の脱分極を細胞内シグナル伝達へと結び付けるL型電位依存性カルシウムチャネルの孔形成サブユニットであるα1Fをコードしています。チャネル活性は、CaM/CaMKやカルシニューリン–NFATシグナルなどの経路を介して、シナプス伝達、神経伝達物質放出、活動依存的な遺伝子発現といったカルシウム依存性プロセスを調節します。ヒト網膜では、CACNA1Fの機能は特に、視細胞から双極細胞への神経伝達および視覚信号処理に重要です。CACNA1Fの遺伝学的障害は、遺伝性網膜疾患や神経発達関連の表現型と関連づけられており、Ca2+チャネルの生物学と疾患機序の研究における重要性を示しています。

L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCACNA1F遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CACNA1F内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CACNA1Fのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、L-type Ca++ CP α1Fタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、L-type Ca++ CP α1Fシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CACNA1F欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• L-type Ca++ CP α1Fの機能に不可欠なCACNA1Fエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CACNA1Fゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびL-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CACNA1F遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  L-type Ca++ CP α1F HDRプラスミド（h）および L-type Ca++ CP α1F HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCACNA1Fホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCACNA1F標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。