L-Selectin/CD62L/SELL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401984-ACT

SELL codifica a L-selectina (CD62L), um recetor de adesão expresso em leucócitos que medeia a ancoragem e o rolamento no endotélio vascular através da ligação a ligandos sialilados e fucosilados. Esta interação coordena o homing de linfócitos para órgãos linfoides secundários e regula o tráfego de leucócitos durante a inflamação, integrando-se com a sinalização “inside-out” induzida por quimiocinas e com a remodelação do citoesqueleto para suportar a extravasão. A clivagem (“shedding”) da L-selectina por metaloproteases ajusta adicionalmente a migração celular e os estados de ativação, ligando a dinâmica de expressão de SELL à vigilância imunitária. Níveis desregulados de CD62L ou padrões de clivagem alterados são frequentemente estudados no contexto da sinalização inflamatória, autoimunidade e biologia de neoplasias hematológicas, onde alterações no tráfego influenciam a infiltração tecidular.

L-Selectin/CD62L/SELL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SELL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

L-Selectin/CD62L/SELL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SELL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SELL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de L-Selectin/CD62L/SELL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SELL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de L-Selectin/CD62L/SELL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via L-Selectin/CD62L/SELL em células tumorais com expressão de SELL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.