KV1.6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409638

概要

KCNA6 は、電位依存性カリウムチャネルサブユニット KV1.6 をコードしており、Shaker 関連の遅延整流性チャネルとして活動電位の再分極を形成し、神経細胞の発火頻度を調節します。膜電位の安定性と興奮性に寄与することで、KV1.6 はシナプス伝達やネットワークオシレーションに影響し、電位依存的なイオン流束によって制御される電気シグナル伝達過程に組み込まれています。KV1 ファミリーのチャネルは、神経伝達物質放出、軸索伝導、活動依存的興奮性を調節する経路に関与しており、カリウムコンダクタンスの変化は神経過興奮性障害に広く関連します。電位依存性 K⁺ チャネル遺伝子の変異や発現調節異常は神経学的表現型と関連づけられており、ヒト細胞モデルにおける興奮性関連メカニズムの研究に KCNA6 の攪乱を用いることの妥当性を支持します。

KV1.6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNA6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNA6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNA6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KV1.6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KV1.6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNA6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KV1.6の機能に不可欠なKCNA6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNA6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KV1.6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKV1.6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNA6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KV1.6 HDRプラスミド（h）および KV1.6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNA6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNA6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。