Kremen-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403791

概要

KREMEN1 は Kremen-1 をコードしており、Kremen-1 は単回膜貫通型受容体です。特に、Dickkopf（DKK）タンパク質の高親和性結合パートナーとしてよく知られており、カノニカルな Wnt/β-カテニンシグナル伝達を調節します。Kremen-1 は LRP5/6 および DKK1 と複合体を形成することで受容体の内在化を促進し、細胞運命決定、増殖、組織恒常性を制御する Wnt 駆動性の転写プログラムを抑制します。この経路との関連から、Wnt 経路のバランス異常が発生表現型や疾患関連のシグナル伝達の再配線に関与する状況において、KREMEN1 は研究対象となってきました。具体的には、がん関連研究や骨関連研究などの分野が挙げられます。また、膜局在性と受容体—リガンド相互作用という特性により、細胞表面での経路クロストークや、下流の β-カテニン依存的な遺伝子発現制御を解析する上でも有用です。

Kremen-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKREMEN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KREMEN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KREMEN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Kremen-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Kremen-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KREMEN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Kremen-1の機能に不可欠なKREMEN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KREMEN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Kremen-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKremen-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KREMEN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Kremen-1 HDRプラスミド（h）および Kremen-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKREMEN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKREMEN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。