Plásmido CRISPR de Activación (m) KLRG1: sc-424537-ACT

El gen murino *Klrg1* codifica KLRG1, un receptor inhibidor tipo lectina C (C-type lectin-like) expresado de forma destacada en subpoblaciones efectoras diferenciadas y de memoria de células NK y linfocitos T CD8+. Al unirse a cadherinas clásicas como la E-cadherina en células diana, KLRG1 transmite señales inhibitorias que modulan la citotoxicidad, la producción de citocinas y la capacidad proliferativa, conectando señales de adhesión con una regulación similar a la de los puntos de control inmunitarios. KLRG1 se utiliza ampliamente como marcador de maduración y estado funcional de las células inmunitarias, y las alteraciones en la señalización de KLRG1 se han asociado con cambios en las respuestas inmunitarias antivirales y antitumorales, el envejecimiento inmunitario y la inflamación crónica. Estas características hacen de *Klrg1* un nodo relevante para estudiar la regulación inmunitaria, la vigilancia tisular y la persistencia de células efectoras en modelos de enfermedad.

KLRG1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Klrg1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KLRG1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Klrg1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Klrg1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KLRG1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Klrg1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KLRG1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KLRG1 en células tumorales con expresión de Klrg1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.