KLRG1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-424537-ACT

マウスのKlrg1は、分化したNK細胞およびCD8+ T細胞のエフェクター／メモリーサブセットに顕著に発現する、抑制性のC型レクチン様受容体KLRG1をコードしています。KLRG1は、標的細胞上のE-カドヘリンなどの古典的カドヘリンに結合することで抑制性シグナルを伝達し、細胞傷害活性、サイトカイン産生、増殖能を調節して、接着に関わる情報を免疫チェックポイント様の制御へと結び付けます。KLRG1は免疫細胞の成熟度や機能状態を示すマーカーとして広く用いられており、KLRG1シグナルの変化は、抗ウイルス／抗腫瘍免疫応答の変動、免疫老化、慢性炎症などとの関連が報告されています。これらの特徴から、Klrg1は疾患モデルにおける免疫制御、組織サーベイランス、エフェクター細胞の持続性を研究する上で重要なターゲットとなります。

KLRG1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Klrg1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KLRG1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Klrg1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKlrg1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KLRG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKlrg1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKLRG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKlrg1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKLRG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。