KLF15 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402267-LAC

KLF15 (fator semelhante a Krüppel 15) codifica um fator de transcrição do tipo zinc-finger que se liga a elementos promotores ricos em GC para coordenar programas gênicos dependentes do contexto que controlam a diferenciação celular, a homeostase metabólica e a transcrição responsiva ao estresse. Em tecidos humanos, o KLF15 integra sinais hormonais e nutricionais para modular vias envolvidas na regulação da gliconeogênese, no uso de lipídios e no equilíbrio energético mitocondrial, além de contribuir para a remodelação transcricional muscular e cardíaca. A expressão desregulada de KLF15 tem sido associada a fenótipos metabólicos alterados e a respostas teciduais maladaptativas em contextos cardiovasculares e de músculo esquelético, tornando-o um alvo útil para estudar o controle transcricional do metabolismo energético e as transições de estado celular. Como regulador transcricional com ampla gama de alvos a jusante, o KLF15 é frequentemente investigado para mapear redes gênicas que acoplam pistas ambientais a resultados epigenéticos e no nível do promotor.

As Partículas de Ativação Lentivirais KLF15 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de KLF15 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais KLF15 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição KLF15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de KLF15. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo KLF15 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.