KIR2.1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401974-ACT

KCNJ2 kodiert die inward-rectifying Kaliumkanal‑Untereinheit KIR2.1, einen zentralen Determinanten des Ruhemembranpotenzials und der Repolarisation des Aktionspotenzials in erregbaren Zellen. Durch die Leitung von IK1‑Strömen stabilisiert KIR2.1 die Membranerregbarkeit und prägt das elektrophysiologische Verhalten in Herz- und Skelettmuskel, indem es in Ionenhomöostase‑Signalwege eingebunden ist, die die Membranspannung mit der Calciumregulation und der Kontraktilität koppeln. Eine Fehlregulation der KCNJ2‑Aktivität oder -Expression ist mit erblichen Arrhythmie‑Phänotypen und neuromuskulären Funktionsstörungen assoziiert und macht KCNJ2 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zu Kanalopathien und elektrischer Signalübertragung. In vitro wird die Modulation der KIR2.1‑Spiegel häufig genutzt, um membranpotenzialabhängige Transkriptionsprogramme, Erregbarkeitsschwellen und Interaktionen in Ionenkanalnetzwerken zu untersuchen.

KIR2.1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KCNJ2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KIR2.1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KCNJ2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KCNJ2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KIR2.1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KCNJ2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KIR2.1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KIR2.1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KCNJ2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.