KIF13A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403751-ACT

KIF13A codifica um motor de microtúbulos da família cinesina-3 que sustenta o transporte de vesículas e complexos proteicos direcionado à extremidade “plus”, contribuindo para o tráfego polarizado e a organização do citoesqueleto. A atividade de KIF13A está ligada a processos de transporte endossomal e de membrana que influenciam a polaridade celular, a dinâmica de sinalização e o controle espacial da entrega de cargas. Por meio de seu papel no transporte intracelular, KIF13A pode impactar vias que regulam a distribuição de receptores de membrana e a integridade de junções celulares. A alteração na regulação desses processos tem sido associada a fenótipos relevantes para inflamação, função de barreira epitelial e outros contextos em que a sinalização dependente de tráfego é crítica.

KIF13A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIF13A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIF13A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIF13A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIF13A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIF13A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIF13A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIF13A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIF13A em células tumorais com expressão de KIF13A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.