KIAA0100 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408006-ACT

A KIAA0100 humana (também conhecida como BCOX1) codifica uma grande proteína citoplasmática pouco caracterizada, implicada na regulação de programas de crescimento e sobrevivência celular. Estudos transcriptômicos e funcionais têm relacionado a KIAA0100 a processos como proliferação, adaptação ao estresse e organização do citoesqueleto ou do tráfego vesicular, sugerindo papéis em redes de sinalização coordenadas que sustentam a aptidão celular. Alterações na expressão de KIAA0100 foram relatadas em diversos tipos de tumores e estão associadas a fenótipos agressivos, tornando-a um alvo molecular útil para o estudo de estados transcricionais oncogênicos. Devido à anotação mecanística limitada, a KIAA0100 é frequentemente investigada por meio de abordagens de perturbação para mapear vias a jusante e parceiros de interação.

KIAA0100 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIAA0100 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIAA0100 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIAA0100 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIAA0100, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIAA0100. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIAA0100 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIAA0100 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIAA0100 em células tumorais com expressão de KIAA0100 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.