Ki67 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400081-NIC

MKI67はKi67をコードしており、Ki67はクロマチン関連の核内タンパク質です。活発に細胞周期が進行している細胞の指標（マーカー）として広く用いられており、発現はS/G2/M期で最大となり、静止期であるG0期の細胞では発現しません。Ki67は高次の染色体構造の形成に寄与し、分裂期染色体周辺部（chromosome periphery）の形成を支えることで、適切な染色体分配と細胞分裂ダイナミクスの維持に関与します。増殖プログラムと密接に連動することから、Ki67は細胞周期の制御ネットワークとも交差し、増殖制御や複製ストレス応答の研究にもしばしば活用されます。MKI67の発現異常（制御破綻）は、多様ながん種における過増殖状態と一般に関連しており、細胞周期制御やがん生物学の機構研究における有用性を裏づけています。

Ki67 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MKI67 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MKI67内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MKI67の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MKI67が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。