KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430617

概要

Kdelr3 は KDEL 受容体 3（KDELR3）をコードしており、ゴルジ体に局在する回収受容体として機能します。KDELR3 は、小胞体（ER）内腔シャペロンが誤ってゴルジ体へ移行した際に、それらの C 末端にある KDEL モチーフを認識し、COPI 依存的な逆行性輸送によってゴルジ体から小胞体へ戻します。ER のプロテオスタシスとカルシウム恒常性を維持することで、KDELR3 は unfolded protein response（UPR）シグナル伝達、分泌経路の忠実性、ならびに初期分泌区画のストレス適応的リモデリングに影響します。KDEL 受容体を介した回収機構の破綻は、糖タンパク質成熟や ER ストレス感受性を変化させ得ます。これらの過程は、神経変性、代謝ストレス、腫瘍細胞の分泌需要を扱う研究でしばしば活用されます。マウス系では、Kdelr3 は ER–ゴルジ輸送がプロテオスタシスネットワークおよび細胞状態遷移とどのように接続するかを解明するための、解析しやすいノードとなります。

KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるKdelr3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Kdelr3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Kdelr3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KDEL receptor 3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KDEL receptor 3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Kdelr3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KDEL receptor 3の機能に不可欠なKdelr3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Kdelr3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Kdelr3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KDEL receptor 3 HDRプラスミド（m）および KDEL receptor 3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKdelr3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKdelr3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。