KCNQ2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402492-ACT

KCNQ2 codifica a subunidade do canal de potássio dependente de voltagem Kv7.2, um componente central das correntes neuronais do tipo M de K+ que estabilizam o potencial de membrana e limitam a descarga repetitiva. Ao moldar o limiar do potencial de ação e a adaptação da frequência de disparo, KCNQ2 influencia a excitabilidade em circuitos corticais e hipocampais e integra-se a vias de sinalização que modulam o gating e o tráfego do canal, incluindo a regulação dependente de fosfoinositídeos na membrana plasmática. A disfunção ou alteração da expressão de KCNQ2 está fortemente associada a distúrbios do espectro das epilepsias e a fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-o um locus amplamente utilizado para estudar a biologia de canais iônicos, a dinâmica de redes sinápticas e as relações genótipo–fenótipo em modelos neuronais humanos.

KCNQ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNQ2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KCNQ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNQ2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNQ2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KCNQ2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNQ2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KCNQ2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KCNQ2 em células tumorais com expressão de KCNQ2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.