KCNMB4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405044-ACT

KCNMB4 codifica a subunidade auxiliar β4 dos canais de potássio (BK) de grande condutância, ativados por cálcio e voltagem, modulando a cinética de abertura/fechamento (gating) do canal, a sensibilidade ao cálcio e a excitabilidade da membrana. Em neurónios humanos e outros tecidos excitáveis, KCNMB4 ajuda a ajustar a geração de potenciais de ação e a repolarização dependente de Ca2+, integrando-se com a sinalização por Ca2+ e a homeostase eletrofisiológica. Ao moldar o comportamento dos canais BK, influencia processos como a neurotransmissão, a adaptação da frequência de disparo e vias de sinalização dependentes da atividade associadas à regulação de canais iónicos. A desregulação da composição dos canais BK, incluindo alterações na expressão de subunidades β, está implicada em fenótipos neurológicos em que o equilíbrio da excitabilidade é perturbado, sustentando a sua utilidade em estudos mecanísticos de canalopatias e de stress celular induzido por excitabilidade.

KCNMB4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNMB4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KCNMB4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNMB4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNMB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KCNMB4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNMB4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KCNMB4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KCNMB4 em células tumorais com expressão de KCNMB4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.