KCNH1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405756-NIC

KCNH1は、電位依存性カリウムチャネルKv10.1（Eag1）をコードしており、静止膜電位や再分極のダイナミクスを形成して細胞の興奮性を調節する膜タンパク質です。K⁺フラックスを制御することで、KCNH1はカルシウム依存性シグナル伝達、細胞周期の進行、移動プログラムに影響を及ぼし、膜電位と連動した経路と交差します。KCNH1活性の変化は、複数の実験系において神経発達に関連する表現型や増殖シグナルの異常制御と関連づけられており、イオンチャネル機能が転写状態や代謝状態とどのように統合されるかを研究するうえで有用な標的となります。ヒト細胞においてKCNH1は、電気生理学的特性を下流のシグナルネットワークおよび表現型アウトプットへと結びつけて検証できる、扱いやすいモデル系を提供します。

KCNH1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNH1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNH1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNH1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNH1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。