Plasmide Double Nickase (h) karyopherin β1: sc-401230-NIC

KPNB1 code la karyophérine β1 (importine‑β1), un récepteur central du transport nucléaire qui assure, de manière dépendante de RanGTP, l’import de protéines portant des signaux classiques de localisation nucléaire, en coopération avec des adaptateurs importine‑α. En régulant le trafic nucléocytoplasmique de facteurs de transcription, de protéines de réparation de l’ADN et de régulateurs du cycle cellulaire, KPNB1 influence les programmes d’expression génique, le contrôle des points de contrôle (checkpoints) et la signalisation en réponse au stress. Cette voie est essentielle à la progression mitotique et à la protéostasie, car l’import nucléaire sélectif coordonne la réplication, la transcription et l’assemblage des ribonucléoprotéines. Des altérations de la dynamique du transport nucléaire et une activité dérégulée de KPNB1 ont été associées à des phénotypes prolifératifs et d’adaptation au stress, ce qui en fait une cible utile pour l’étude de la signalisation oncogénique, du maintien du génome et des interactions hôte–pathogène.

karyopherin β1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KPNB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KPNB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KPNB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KPNB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.