KA2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405272-ACT

GRIK5はカイニン酸受容体サブユニットKA2をコードしており、KA2は他のカイニン酸受容体サブユニットと会合して、興奮性シナプスにおける機能的なイオンチャネル型グルタミン酸受容体を形成するために必須のパートナーです。KA2含有受容体は、カチオン流入を調節して神経細胞の興奮性を形作ることで、速いシナプス伝達および活動依存的可塑性に寄与し、GRIK5をグルタミン酸作動性シグナル伝達ネットワークやカルシウム依存性の下流経路と結び付けています。シナプス統合や回路レベルでの興奮／抑制バランスへの影響を介して、KA2の発現量変化や受容体組成の変化は、神経発達および神経精神疾患様の表現型や発作感受性との関連で研究されています。これらの特性により、GRIK5はヒト細胞モデルにおいて、シナプス受容体の組み立て、トラフィッキング、ならびに興奮性神経伝達を検討するための有用なノードとなります。

KA2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GRIK5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KA2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GRIK5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGRIK5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KA2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGRIK5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKA2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGRIK5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKA2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。