Junctophilin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401805-ACT

JPH2 codifica a junctofilina-2, uma proteína estrutural de ancoragem de membranas que estabiliza complexos de membrana juncionais entre o túbulo transverso/membrana plasmática e o retículo sarcoplasmático no músculo estriado. Ao manter essas membranas em íntima proximidade, a junctofilina-2 favorece um acoplamento excitação–contração eficiente e a liberação de cálcio induzida por cálcio por meio do acoplamento funcional entre canais de Ca²⁺ dependentes de voltagem e receptores de rianodina. A JPH2 participa do manejo de Ca²⁺ em cardiomiócitos e no músculo esquelético, da organização de microdomínios de membrana e da remodelação da arquitetura juncional em resposta ao estresse. Alterações na expressão ou na função de JPH2 têm sido associadas à desregulação da homeostase do cálcio e à remodelação estrutural observadas em cardiomiopatias hereditárias e adquiridas, inclusive em contextos associados a fenótipos arritmogênicos.

Junctophilin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JPH2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Junctophilin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JPH2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JPH2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Junctophilin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JPH2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Junctophilin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Junctophilin-2 em células tumorais com expressão de JPH2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.