JNK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400048-ACT

MAPK8 codifica a quinase N-terminal de c-Jun 1 (JNK1) humana, uma quinase MAP ativada por estresse que fosforila fatores de transcrição como o c-JUN e modula programas gênicos dependentes de AP-1. A JNK1 integra sinais de citocinas, estresse oxidativo, irradiação UV e estresse do retículo endoplasmático para regular apoptose, autofagia, inflamação e controle do ciclo celular por meio do crosstalk entre as vias MAPK e NF-κB. Essa via contribui para decisões celulares que influenciam a transformação oncogênica, processos neurodegenerativos e fenótipos metabólicos e inflamatórios, tornando o MAPK8 um nó amplamente utilizado para a dissecação mecanística de vias. A sinalização desregulada de JNK1 tem sido associada a alterações na sinalização imune e em redes de resposta ao estresse em múltiplos contextos relevantes para doenças, reforçando sua utilidade em estudos de genômica funcional.

JNK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAPK8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JNK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAPK8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAPK8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JNK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAPK8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JNK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JNK1 em células tumorais com expressão de MAPK8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.