JNK1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400048-ACT

MAPK8 codifica per la c-Jun N-terminal kinase 1 (JNK1) umana, una chinasi MAP attivata dallo stress che fosforila fattori di trascrizione come c-JUN e modula programmi genici dipendenti da AP-1. JNK1 integra segnali provenienti da citochine, stress ossidativo, irradiazione UV e stress del reticolo endoplasmatico per regolare apoptosi, autofagia, infiammazione e controllo del ciclo cellulare attraverso il crosstalk tra MAPK e NF-κB. Questa via contribuisce a decisioni cellulari che influenzano la trasformazione oncogena, i processi neurodegenerativi e fenotipi metabolici e infiammatori, rendendo MAPK8 un nodo ampiamente utilizzato per la dissezione meccanicistica delle vie di segnalazione. Una segnalazione JNK1 disregolata è stata collegata ad alterazioni della segnalazione immunitaria e delle reti di risposta allo stress in molteplici contesti rilevanti per la malattia, supportandone l’utilità negli studi di genomica funzionale.

JNK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPK8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JNK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPK8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPK8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JNK1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPK8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JNK1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JNK1 nelle cellule tumorali con espressione di MAPK8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.