JMJD5 Plasmide Double Nickase (h): sc-405787-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- JMJD5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il JMJD5 Double Nickase Plasmid (h) e il JMJD5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KDM8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: JMJD5 Antibody (D-5): sc-377078
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
JMJD5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
JMJD5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM8 (JMJD5) codifica una diossigenasi contenente il dominio Jumonji C che agisce come regolatore epigenetico, collegando lo stato della cromatina al controllo trascrizionale. JMJD5 è stata implicata in attività di idrossilazione/demetilazione di substrati istonici e non istonici e modula processi quali la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e l’espressione di geni metabolici. Attraverso interazioni con complessi trascrizionali e associati alla cromatina, JMJD5 contribuisce alla regolazione di vie responsivi all’ipossia e allo stress e al coordinamento di programmi proliferativi. Un’attività o un’espressione deregolata di JMJD5 è stata associata ad alterazioni del controllo della crescita e del mantenimento del genoma, rendendo KDM8 un bersaglio utile per studi meccanicistici in biologia del cancro e in disturbi correlati.
JMJD5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KDM8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KDM8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KDM8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KDM8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.