JMJD1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403423

Übersicht

KDM3A kodiert JMJD1A, eine Histon-Demethylase mit Jumonji-C-(JmjC)-Domäne, die vor allem repressive H3K9me1/2-Markierungen entfernt und dadurch die Transkriptionsaktivierung fördert. Durch die Umgestaltung der Chromatinzugänglichkeit moduliert JMJD1A Programme, die mit der Signalübertragung von Hormonrezeptoren, Hypoxieantworten, metabolischer Genexpression und Entscheidungen über Zellschicksale verknüpft sind. Seine Aktivität greift in die epigenetische Regulation von Enhancer- und Promotorzuständen ein und beeinflusst damit Signalwege, die Proliferation, Differenzierung und Stressadaptation steuern. Eine fehlregulierte Expression oder Funktion von KDM3A/JMJD1A wurde mit veränderten Transkriptionsnetzwerken in verschiedenen Krebszusammenhängen und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was die Untersuchung epigenetischer Verwundbarkeiten unterstützt.

Das JMJD1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KDM3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KDM3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KDM3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die JMJD1A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KDM3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der JMJD1A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KDM3A-Exone abzielen, die für die JMJD1A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KDM3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom JMJD1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom JMJD1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KDM3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das JMJD1A HDR-Plasmid (h) und JMJD1A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KDM3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KDM3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.