JMJD1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403423

概要

KDM3Aは、Jumonji C（JmjC）ドメインを有するヒストン脱メチル化酵素であるJMJD1Aをコードしており、主に抑制的なH3K9me1/2マークを除去することで転写活性化を促進します。JMJD1Aはクロマチンのアクセシビリティを再編することにより、ホルモン受容体シグナル伝達、低酸素応答、代謝関連遺伝子の発現、細胞運命決定に結び付くプログラムを調節します。その活性はエンハンサーおよびプロモーター状態のエピジェネティックな制御と交差し、増殖、分化、ストレス適応を司る経路に影響を与えます。KDM3A/JMJD1Aの発現や機能の破綻は、複数のがんの文脈や代謝表現型にわたって観察される転写ネットワークの変化と関連しており、エピジェネティックな脆弱性の探索を後押ししています。

JMJD1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKDM3A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KDM3A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KDM3Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、JMJD1Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、JMJD1Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KDM3A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• JMJD1Aの機能に不可欠なKDM3Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KDM3Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• JMJD1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびJMJD1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KDM3A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  JMJD1A HDRプラスミド（h）および JMJD1A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKDM3Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKDM3A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。