JAK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400439-ACT

A quinase Janus 1 (JAK1) é uma tirosina quinase não receptora que transduz sinais de múltiplos receptores de citocinas, incluindo os receptores de interferon tipo I e tipo II, para regular respostas imunes inatas e adaptativas. Após o engajamento do receptor, a JAK1 fosforila fatores de transcrição STAT para acionar programas gênicos que controlam a defesa antiviral, a inflamação e a sobrevivência celular, e ela se integra a dinâmicas mais amplas da rede JAK–STAT, que ajustam a sensibilidade a citocinas e a regulação por feedback. Alterações na atividade ou na expressão de JAK1 têm sido associadas a uma sinalização de citocinas desregulada em distúrbios imunomediados e a fenótipos de evasão imune tumoral por meio de resposta prejudicada ao interferon. Como um nó central de sinalização, a JAK1 é amplamente estudada em vias que governam a biologia de células hematopoéticas e epiteliais, respostas ao estresse e a comunicação cruzada com a sinalização MAPK e PI3K/AKT.

JAK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JAK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JAK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JAK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JAK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JAK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JAK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JAK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JAK1 em células tumorais com expressão de JAK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.