Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
JAB1 Double Nickase Plasmid (m): sc-424107-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das JAB1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- JAB1 Double-Nickase-Plasmid (m) und JAB1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cops5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: JAB1: sc-13157
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
JAB1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424107-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
JAB1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424107-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Cops5 kodiert JAB1 (CSN5), die Metalloprotease-Untereinheit des COP9-Signalosoms, die die Deneddylierung von Cullinen katalysiert und dadurch die Aktivität von cullin-RING-E3-Ubiquitin-Ligasen sowie die Proteostase reguliert. Über diese Funktion koordiniert JAB1 den Verlauf des Zellzyklus, DNA-Schadensantworten und Signaltransduktionsausgänge, indem es den Umsatz und die Lokalisation zentraler regulatorischer Proteine steuert, darunter Modulatoren von AP-1-abhängigen Transkriptionsprogrammen. JAB1 ist zudem in Signalwege eingebunden, die Apoptose, Stressantworten und entzündliche Signalgebung kontrollieren, und verknüpft so ubiquitinabhängige Regulation mit kontextabhängiger Transkriptionssteuerung. Eine fehlregulierte CSN5/COP9-Funktion wurde in mehreren krankheitsrelevanten Modellen mit aberranter Proliferation und veränderten Signalzuständen in Verbindung gebracht, was Cops5 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien zur Kontrolle des Ubiquitin-Proteasom-Systems macht.
JAB1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cops5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cops5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cops5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cops5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.