JAB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401302-ACT

COPS5 codifica a JAB1 (também conhecida como CSN5), uma subunidade catalítica do sinalossoma COP9 que regula ligases de ubiquitina do tipo cullin-RING por meio da desneddilação, moldando assim a proteostase e a progressão do ciclo celular. Ao modular a degradação dependente de ubiquitina de proteínas-chave de sinalização e de checkpoints, a JAB1 influencia vias ligadas a respostas a danos no DNA, controle transcricional e adaptação ao estresse celular. A JAB1 também interage com a sinalização de receptores nucleares e com programas transcricionais relacionados ao sistema imune, ajudando a coordenar a expressão gênica específica do contexto. A atividade desregulada de COPS5/JAB1 tem sido associada a alterações de proliferação, sinalização de sobrevivência e fenótipos invasivos em múltiplos modelos relevantes para o câncer, o que a torna um alvo frequente em estudos mecanísticos de circuitos oncogênicos.

JAB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COPS5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JAB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COPS5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COPS5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JAB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COPS5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JAB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JAB1 em células tumorais com expressão de COPS5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.