IRF-7 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400450-LAC

IRF7 codifica il fattore regolatore dell’interferone 7 (IRF-7), un regolatore trascrizionale principale delle risposte all’interferone di tipo I a valle dei recettori di riconoscimento dei pattern, quali TLR7/9, i recettori di tipo RIG-I e la segnalazione cGAS–STING. Una volta attivato, IRF-7 va incontro a dimerizzazione dipendente dalla fosforilazione e trasloca nel nucleo per indurre i programmi di IFNA/IFNB e dei geni stimolati dall’interferone, che modellano l’immunità innata antivirale. L’attività di IRF-7 si integra con le vie di NF-κB e MAPK per coordinare reti trascrizionali infiammatorie e il crosstalk tra immunità innata e adattativa. Una segnalazione di IRF7 deregolata è stata collegata a una difesa antivirale alterata, a infiammazione cronica e a fenotipi autoimmuni, incluse le firme di interferone associate al lupus eritematoso sistemico.

Le particelle di attivazione lentivirale IRF-7 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IRF7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IRF-7 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IRF7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IRF-7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IRF7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.