IRF-7 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424785-ACT

Il gene Irf7 del topo codifica IRF-7, un regolatore trascrizionale maestro delle risposte all’interferone di tipo I che coordina l’immunità innata antivirale a valle di recettori di riconoscimento dei pattern, come i recettori di tipo RIG-I e i recettori Toll-like. Una volta attivato, IRF-7 integra la segnalazione derivante dalla fosforilazione dipendente da TBK1/IKKε e dalla traslocazione nel nucleo, inducendo programmi di geni stimolati da interferone attraverso l’asse JAK–STAT. L’attività di Irf7 modella la segnalazione infiammatoria, le risposte di cellule dendritiche e macrofagi e il cross-talk con le reti citochiniche mediate da NF-κB. Firme di interferone dipendenti da IRF-7 deregolate sono rilevanti in modelli di suscettibilità virale, infiammazione cronica e patologia di tipo autoimmune, supportando studi meccanicistici dei processi patologici guidati dall’interferone.

IRF-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Irf7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IRF-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Irf7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Irf7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IRF-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Irf7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IRF-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IRF-7 nelle cellule tumorali con espressione di Irf7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.