IRF-5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400920-ACT

IRF5 codifica il fattore regolatore dell’interferone 5 (IRF-5), un fattore di trascrizione che coordina programmi genici dell’immunità innata e dell’infiammazione a valle dei recettori di riconoscimento dei pattern e della segnalazione mediata da citochine. IRF-5 contribuisce alle risposte all’interferone di tipo I, alle reti trascrizionali associate a NF-κB e alla polarizzazione di macrofagi e cellule dendritiche tramite la regolazione di geni stimolati dall’interferone e di citochine pro-infiammatorie. Un’alterata attività di IRF5 è stata collegata a una segnalazione immunitaria disregolata nell’autoimmunità sistemica e in fenotipi infiammatori cronici, rendendolo un nodo frequentemente studiato nell’immunogenetica e nella difesa dell’ospite. Nelle cellule umane, la funzione di IRF-5 viene comunemente analizzata in vie correlate alla segnalazione dei recettori Toll-like, alle risposte antivirali e al controllo trascrizionale della produzione di citochine.

IRF-5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IRF5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IRF-5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IRF5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IRF5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IRF-5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IRF5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IRF-5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IRF-5 nelle cellule tumorali con espressione di IRF5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.