IRF-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400288-ACT

O IRF4 humano codifica o fator regulador de interferon 4 (IRF-4), um fator de transcrição definidor de linhagem que molda a diferenciação de células imunes e programas de expressão gênica dependentes de estímulos. O IRF-4 coopera com PU.1, BATF e NF-κB para regular a acessibilidade de enhancers e os resultados transcricionais que controlam a maturação de células B, o desenvolvimento de plasmócitos, a ativação de células T e a produção de citocinas. Ele integra sinais de receptores de antígeno e de vias de citocinas para coordenar estados metabólicos e proliferativos durante as respostas imunes. A atividade desregulada do IRF4 e redes transcricionais alteradas estão implicadas na inflamação mediada pelo sistema imune e na biologia de malignidades hematológicas, tornando o IRF-4 um nó-chave para estudos mecanísticos de sinalização imune e regulação transcricional.

IRF-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRF4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRF-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRF4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRF4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRF-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRF4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRF-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRF-4 em células tumorais com expressão de IRF4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.