Plasmide Double Nickase (m) IRE1α: sc-429758-NIC

Le gène murin **Ern1** code **IRE1α**, une kinase/endoribonucléase transmembranaire du réticulum endoplasmique (RE) qui agit comme capteur central de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). En situation de stress du RE, IRE1α s’oligomérise et active l’épissage de l’ARNm **Xbp1** afin de générer le facteur de transcription **XBP1s**, tout en engageant la dégradation régulée dépendante d’IRE1 (RIDD) pour remodeler les transcrits associés au RE. Par des interactions croisées avec les branches **PERK** et **ATF6**, IRE1α coordonne la protéostasie, la capacité de la voie sécrétoire, le métabolisme lipidique, l’autophagie et la signalisation inflammatoire. Une dérégulation de la signalisation IRE1α–XBP1 est impliquée dans le stress métabolique, la neurodégénérescence, la différenciation des cellules immunitaires et l’adaptation du microenvironnement tumoral, faisant d’**Ern1** un nœud clé pour les études mécanistiques des réponses au stress du RE.

IRE1α Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ern1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ern1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ern1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ern1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.