IRE1α Plasmide Double Nickase (m): sc-429758-NIC

Il gene murino **Ern1** codifica per **IRE1α**, una chinasi/endoribonucleasi transmembrana del reticolo endoplasmatico (RE) che funge da sensore centrale della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR). In condizioni di stress del RE, IRE1α oligomerizza e attiva lo splicing dell’mRNA di **Xbp1** per generare il fattore di trascrizione **XBP1s**, attivando al contempo la degradazione regolata dipendente da IRE1 (RIDD) per rimodellare i trascritti associati al RE. Attraverso il crosstalk con i rami **PERK** e **ATF6**, IRE1α coordina la proteostasi, la capacità della via secretoria, il metabolismo lipidico, l’autofagia e la segnalazione infiammatoria. Una segnalazione IRE1α–XBP1 deregolata è implicata nello stress metabolico, nella neurodegenerazione, nella differenziazione delle cellule immunitarie e nell’adattamento del microambiente tumorale, rendendo **Ern1** un nodo chiave per studi meccanicistici delle risposte allo stress del RE.

IRE1α Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ern1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ern1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ern1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ern1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.