IRAK-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421100-ACT

Irak1 codifica a quinase 1 associada ao recetor de interleucina-1 (IRAK-1), uma quinase de serina/treonina que atua como transdutor proximal de sinalização a jusante do recetor de IL-1 e de muitos recetores do tipo Toll (TLR). Após a ativação do recetor, a IRAK-1 participa na sinalização dependente de MyD88 para promover a ativação das vias de NF-κB e MAPK, moldando programas transcricionais que regulam a produção de citocinas, a ativação de células imunitárias inatas e o controlo por retroalimentação da inflamação. Em modelos murinos, alterações na atividade da IRAK-1 têm sido associadas a desregulação da sinalização inflamatória e a fenótipos imunitários relevantes para estudos de autoimunidade, biologia de infeções e dano tecidular associado à inflamação. A IRAK-1 também é frequentemente investigada no contexto do cross-talk entre a sinalização TLR/IL-1R, respostas a interferão e cascatas de quinases ativadas por stress.

IRAK-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Irak1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRAK-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Irak1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Irak1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRAK-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Irak1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRAK-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRAK-1 em células tumorais com expressão de Irak1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.