IQGAP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400597-ACT

IQGAP1 umano codifica una proteina scaffold multidominio che integra la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho con la dinamica di actina e microtubuli, coordinando polarità cellulare, adesione e migrazione direzionale. IQGAP1 interagisce con CDC42/RAC1, la calmodulina e componenti delle giunzioni aderenti, collegando il rimodellamento del citoscheletro agli output di segnalazione associati a MAPK/ERK e Wnt/β-catenina. Attraverso queste interazioni a livello di rete, IQGAP1 influenza processi quali la citocinesi, il traffico dei recettori e l’organizzazione spaziale dei complessi di segnalazione sulla membrana plasmatica. Un’espressione o una localizzazione deregolate di IQGAP1 sono spesso studiate nel contesto di programmi aberranti di proliferazione e invasione, rendendola rilevante per la ricerca meccanicistica in biologia del cancro e in altri disturbi che coinvolgono difetti del citoscheletro e delle giunzioni cellulari.

IQGAP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IQGAP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IQGAP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IQGAP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IQGAP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IQGAP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IQGAP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IQGAP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IQGAP1 nelle cellule tumorali con espressione di IQGAP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.