IP3R-III Lentiviral Activation Particles (m): sc-421194-LAC

Itpr3は、イノシトール1,4,5-三リン酸受容体3型（IP3R-III）をコードしており、これは小胞体からのCa²⁺放出を担うチャネルで、GPCRおよび受容体型チロシンキナーゼのシグナルがPLCにより産生されるIP3を介して下流で活性化される。IP3R-IIIを介したCa²⁺トランジェントは、分泌、上皮輸送、ミトコンドリアのバイオエネルゲティクス、ならびにカルシニューリン–NFATやCaMKシグナルなどの経路を介するCa²⁺依存的遺伝子発現を含む多様な過程を調節する。マウス組織ではIP3R-IIIの発現は上皮系および分泌系の系譜で高く、極性化Ca²⁺シグナル、小胞体–ミトコンドリア接触部位、刺激に連動したカルシウムオシレーションの研究を後押ししている。IP3R-III活性およびCa²⁺恒常性の破綻は、細胞ストレス応答や、上皮機能不全および異常な増殖シグナルに関わる疾患関連表現型と結び付けられており、Itpr3は機構論的モデリングに有用なノードとなる。

IP3R-III レンチウイルス活性化粒子（m）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なItpr3の発現上昇を可能にします。

IP3R-III レンチウイルス活性化粒子（m）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、Itpr3転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性IP3R-IIIの発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のItpr3ゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。