IP3R-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400986

概要

ITPR1は、イノシトール1,4,5-三リン酸受容体1型（IP3R-I）をコードしており、これは小胞体に存在するCa²⁺放出チャネルで、PLC共役受容体の下流で生じるIP₃シグナルを、細胞質およびミトコンドリアのカルシウム一過性（トランジェント）へと変換します。IP3R-Iを介したCa²⁺フラックスは、興奮—転写連関、シナプス可塑性、分泌、アポトーシスを制御し、GPCR/RTK–PLCβ/γ–IP₃シグナル、カルモジュリン/CaMK、カルシニューリン–NFAT、ならびに小胞体—ミトコンドリア接触部位における情報伝達などの経路と統合されます。ITPR1活性はカルシウム恒常性とストレス応答を形成し、神経発火、オートファジー、アンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル伝達といった細胞表現型にも影響します。ITPR1の遺伝的変異や発現・機能の破綻は、脊髄小脳失調症様の表現型を含む神経機能障害と関連づけられており、ヒト細胞におけるカルシウムシグナル伝達の機構研究に有用な標的となっています。

IP3R-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるITPR1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ITPR1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ITPR1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IP3R-Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IP3R-Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ITPR1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IP3R-Iの機能に不可欠なITPR1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ITPR1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IP3R-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびIP3R-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ITPR1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IP3R-I HDRプラスミド（h）および IP3R-I HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはITPR1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のITPR1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。