Plásmido Doble Nickase (h) involucrin: sc-416724-NIC

IVL codifica la involucrina, un marcador de diferenciación de los queratinocitos que es entrecruzado en la envoltura cornificada por transglutaminasas para reforzar la barrera epidérmica. La involucrina participa en programas de diferenciación terminal coordinados con la remodelación de los filamentos intermedios de queratina y la señalización dependiente de calcio que sostiene la cornificación. La alteración de la expresión de IVL y del ensamblaje de la envoltura se ha asociado con una homeostasis epidérmica desregulada en afecciones cutáneas inflamatorias e hiperproliferativas, como la psoriasis y la dermatitis atópica, y se examina con frecuencia en el contexto de defectos de la barrera. En consecuencia, IVL se utiliza ampliamente para estudiar la maduración del epitelio estratificado, la formación de la barrera y las redes transcripcionales que gobiernan el destino de los queratinocitos.

involucrin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IVL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IVL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IVL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IVL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.