Integrin αX/ITGAX/CD11c Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421170-ACT

Itgax codifica a integrina αX (CD11c), que forma um heterodímero com ITGB2 para gerar a integrina leucocitária αXβ2 (CR4), responsável por mediar a adesão a superfícies opsonizadas por iC3b e por contribuir para a fagocitose dependente do complemento. O CD11c é fortemente expresso em células dendríticas, em subpopulações de macrófagos e em outras populações mieloides, conectando sinais da matriz extracelular e do complemento à remodelação do citoesqueleto, à migração e à formação da sinapse imune. Por meio da sinalização “outside-in” de integrinas, o ITGAX influencia vias que envolvem quinases da família Src, Syk, PI3K e pequenas GTPases, as quais regulam a captação de antígenos, o tráfego intracelular e programas de genes inflamatórios. A ativação mieloide e a apresentação de antígenos associadas ao ITGAX, quando desreguladas, têm sido implicadas em inflamação autoimune, na biologia de infecções crônicas e na remodelação do microambiente tumoral-imune em modelos murinos.

Integrin αX/ITGAX/CD11c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Itgax sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin αX/ITGAX/CD11c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Itgax em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Itgax, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin αX/ITGAX/CD11c. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Itgax nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin αX/ITGAX/CD11c no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin αX/ITGAX/CD11c em células tumorais com expressão de Itgax silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.